纳米银标记蛋白-物理吸附
简介
银纳米颗粒偶联物可用于多种生物应用，包括生物传感和生物成像。常见的制备稳定的纳米银偶联物的方法包括物理吸附和共价健。
蛋白质分子在银纳米颗粒上的物理吸附是由蛋白质分子与胶体银表层之间的静电和疏水相互作用介导的。这一过程的实现要求pH值接近需要偶联的蛋白质的pl。还有一个重要的参数是蛋白质的装裁量，如果表面吸附的蛋白质不够充分，那么在标准缓冲液中加入电解质后就会发生聚集。因此，需要漓定来确定蛋白质浓度，达到银纳米颗粒表面的完全饱和，同时也起到一个屏蔽作用。然而，一些蛋白质在物理吸附时可能会受到其结构的干扰，这可能会削弱其在分子结合应用中的亲和力或特异性。为了更好地保持偶联蛋白的活性，可以通过PEG-接头将蛋白质分子偶联到羚基化的银纳米颗粒上。由于PEG-接头的固有迁移率和与金表面的距离增加，PEG-接头允许偶联的蛋白质分子可以更好地接近其抗原或底物。此外，屏蔽的聚乙二醇(PEG)层通常也会促进偶联的稳定性、减少非特异性结合偶联物，可以使用碳二亚胺(EDC/NHS)偶联化学方法实现与这些功能化颗粒偶联。
物理吸附方法偶联蛋白
1.试剂准备
标准银纳米粒子
10% Nacl (w/v)
10% Tween 20 (w/v)
2mM 柠檬酸三钠
10X PBS
BSA
紫外可见分光光度计
2.偶联步骤
(1)将银纳米粒子分装到1.5ml离心管中；
(2)银纳米粒子溶液pH值调到所需的pH值，即接近蛋白质的等电点；
(3)在银纳米粒子溶液中加入适量的蛋白质，充分混合，确定达到表面饱和；
(4)室温下孵育10分钟；
(5)加入10%NaCl溶液，并在室温下孵育10分钟；
(6)通过加入10%NaCl溶液后的颜色变化和使用外可见分光光度计测定样品来确定银纳米粒子表面蛋白质饱和且无聚集，通过测量690nm处吸光度值增加，以及405-480nm处的吸光度值降低确定聚集程度(具体值取决于纳米粒子的大小)。还可以通过琼脂糖凝胶电泳来确定饱和银胶体所需蛋白质的量。
(7)将所需体积的银纳米粒子转移到1.5ml 离心管中；
(a)加入Tween 20至浓度为 0.025%；
(9)离心，使银纳米颗粒沉淀；
(10)用2mM柠檬酸三钠重悬至原始体积和浓度；
(11)调整pH值，再加入适量蛋白质；
(12)室温下孵育1h;
(13)根据纳米粒子的大小进行离心，去上清；
(14)用加有1%BSA的1X PBS重悬；(若发生聚集，可以用很短暂震荡分散开)(15)银纳米粒子复合体的功能验证，并存储。
注：银纳米粒子偶联蛋白分子的效果与蛋白质的种类具有一定关系，需要根据蛋白质分子结均和士小选择合活的压联方注
中科科优是纳米材料的销售、研发、制造、应用服务于一体的高科技型企业。目前中科科优已与多所科研院校、航空航天单位及众多生产制造企业建立了长期合作关系。产品涵盖纳米银粉、片状银粉、银纳米线纳米管、纳米银分散液、水溶性银纳米颗粒、油溶性银纳米颗粒、银纳米棒纳米片、CTAB修饰银、PEG修饰银、PEI修饰银、功能化纳米银等。产品种类齐全，可以满足各类客户研发、试验及生产、消费等不同个性化材料需求，多年来得到了广大用户的普遍信赖。
