银纳米颗粒 银纳米粒子纳米银标记蛋白-化学结合
纳米银标记蛋白-化学结合
银纳米颗粒偶联物可用干多种生物应用，包括生物传感和牛物成像。常见的制备稳定的纳米银偶联物的方法包括物理吸附和共价键。蛋白质分子在银纳米颗粒上的物理吸附是由蛋白质分子与胶体银表层之间的静电和疏水相互作用介导的。这一过程的实现要求pH值接近需要偶联的蛋白质的 pl。然而，一些蛋白质在物理吸附时可能会受到其结构的干扰，这可能会肖弱其在分子结合应用中的亲和力或特异性。为了更好地保持偶联蛋白的活性，可以通过PEG接头将蛋白质分子偶联到羧基化的银纳米颗粒上，由于 PEG-接头的固有迁移率和与金表面的距离增加，PEG-接头允许偶联的蛋白质分子可以更好地接近其抗原或底物。此外，屏蔽的聚乙二醇(PEG)层通常也会促进偶联的稳定性、减少非特异性结合偶联物。可以使用碳二亚胺(EDC/NHS)偶联化学方法实现与这些功能化颗粒偶联。
蛋白质与羧基化银纳米粒子的共价结合
1.试剂准备
羧基化银纳米粒子(确定浓度)
EDC
Sulfo-NHS
拟偶联的蛋白质(1XPBS)
BSA
活化缓冲液 MES，pH5.5
偶联缓冲液:1XPBS
洗涤缓冲液:1XPBS，0.05% Tween 20(PBST)
2.偶联步骤
(1)在MES 缓冲液中制备 30、60mg/ml EDC/NHS 溶液
(2)将等体积羧基化银纳米粒子和EDC/NHS 溶液混合;
(3)室温下孵育30分钟;
(4)加入洗涤缓冲液并充分混合
(5)根据银纳米粒子粒径进行离心;
(6)去除上清液;
(7)加入适量拟偶联的蛋白质(1XPBS);
(8) 摇床孵育2-4h;
(9)加入PBST，充分混合;
(10)根据银纳米粒子粒径进行离心;
(11)去上清，用含1%BSA的1XPBS 重悬;
(12)短暂超声处理;
(13)验证银纳米粒子复合体的功能，并储存。
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